植物類(lèi)黃酮含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
注意：正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品說(shuō)明：
類(lèi)黃酮是一類(lèi)多苯化合物，屬于植物次生代謝物，對(duì)人體具有消炎，抗菌，降血脂，清除體內(nèi)羥自由基，預(yù)防癌癥等作用。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：
天平、烘箱、粉碎儀、篩子、超聲破碎儀、60%乙醇、離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96 孔板、蒸餾水。
操作步驟：
一、測(cè)定操作表
1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 470nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 操作表
| 對(duì)照管 | 測(cè)定管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 空白管 |
樣本待測(cè)液（µL） | 60 | 60 |
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標(biāo)準(zhǔn)溶液（μL） |
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| 60 |
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蒸餾水（μL） |
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| 60 |
試劑一（µL） | 15 | 15 | 15 | 15 |
混勻，室溫靜置 5min | ||||
試劑二（µL） |
| 15 | 15 | 15 |
混勻，室溫靜置 5min | ||||
試劑三（µL） | 120 | 120 | 120 | 120 |
60%乙醇（µL） | 105 | 90 | 90 | 90 |
混勻，37℃水浴 45 min，10000g，10min 離心取上清，取 200µL 于微量玻璃比色皿/96 孔板中測(cè)定 A470。計(jì)算ΔA=A 測(cè)定-A 對(duì)照，ΔAˊ=A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白。 | ||||
二、類(lèi)黃酮含量計(jì)算
1、 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制
以單寧酸濃度為橫坐標(biāo)，ΔAˊ為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn) y=kx+b，將ΔA 帶入方程求得 x； 2、 按樣本鮮重計(jì)算
類(lèi)黃酮含量（mg/g 鮮重）= x×V 提取÷W=x÷W 3、 按樣本蛋白濃度計(jì)算
類(lèi)黃酮含量（mg/ mg prot）= x×V 提取÷(Cpr×V 提取) = x÷Cpr
V 提取：加入提取液體積，1mL；W：樣本鮮重，g；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL。
注意事項(xiàng)：
1、 OD 值大于 0.4，樣品適當(dāng)稀釋再測(cè)定，注意計(jì)算公式里乘以稀釋倍數(shù)。
2、 顯色完成后立即測(cè)定，2 小時(shí)后吸光值會(huì)下降。
實(shí)驗(yàn)代做服務(wù)：
實(shí)驗(yàn)室代做實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目
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| 染色質(zhì)免疫沉淀分析(CLIP)實(shí)驗(yàn)服務(wù)
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